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非洲豬瘟檢測方案

更新時間:2023-05-05      瀏覽次數(shù):554

1 非洲豬瘟簡介

非洲豬瘟(英文名稱:African Swine fever,簡稱:ASF)是由非洲豬瘟病毒(英文名稱:African Swine fever virus,簡稱:ASFV)感染家豬和各種野豬(如非洲野豬、歐洲野豬等)引起一種急性、出血性、烈性傳染病。非洲豬瘟病毒是非洲豬瘟科非洲豬瘟病毒屬的重要成員,病毒有些特性類似虹彩病毒科和痘病毒科。病毒粒子的直徑為175-215納米,呈20面體對稱,有囊膜?;蚪M為雙股線狀DNA,大小170-190kb。在豬體內(nèi),非洲豬瘟病毒可在幾種類型的細(xì)胞漿中,尤其是網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞中復(fù)制。該病毒可在鈍緣蜱中增殖,并使其成為主要的傳播媒介。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報告動物疫病,該病也是我國重點防范的一類動物疫情。

2 非洲豬瘟在我國的發(fā)病情況

2018年8月3日我國確診非洲豬瘟疫情以來,我國已經(jīng)在遼寧、安徽、黑龍江、海南等地接連爆發(fā)非洲豬瘟疫情。盡管非洲豬瘟傳入我國僅年的時間,但已經(jīng)在多地接連爆發(fā),造成了巨大的經(jīng)濟損失,而且非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似,只能依靠實驗室監(jiān)測確診。在目前的情況下,急需一種能對非洲豬瘟進行快速檢測的方案!

3 非洲豬瘟病毒(ASFV)實時等溫擴增儀配置清單



項目

序號

物品名稱

型號規(guī)格

單位

數(shù)量

備注

1. 

儀器主機

HW-ZW16

1


2. 

儀器使用說明書


1


3. 

合格證/保修卡


2


4. 

儀器電源線


1


5. 

鋁合金箱


1


6. 

電子天平

0-500g

1


7. 

樣品杯

50mL

24


8. 

移液槍

1-5ml

1


9. 

移液槍槍頭

1-5ml

1


10. 

移液槍

100μL-1000μL

1


11. 

移液槍槍頭

100μL-1000μL

1


12. 

移液槍

10μL-100μL

1


13. 

移液槍槍頭

10μL-100μL

1


14. 

移液槍

2μL-20μL

1


15. 

移液槍槍頭

2μL-20μL

1


16. 

剪刀


1


17. 

鑷子


1


18. 

研缽

直徑8cm

1


19. 

離心機

大龍D1008

1


20. 

離心管

1.5mL

50


21. 

PCR管

0.2mL

50


22. 

非洲豬瘟病毒熒光等溫擴增檢測試劑

48T/盒

5


23. 

漩渦混勻器


1


24. 

畜牧恒溫箱

-10℃~65℃

1


25. 

高速冷凍離心機

LC-LX-HR165A

1


26. 

研磨儀


1


27. 

移液器(5種型號)


10


28. 

冰箱


1



4 非洲豬瘟病毒(ASFV)實時等溫擴增儀技術(shù)參數(shù)

赤霉素檢測儀 

儀器型號

HW-ZW16

樣品通量

16x0.2ml,兼容單管和8聯(lián)管

加熱方式

半導(dǎo)體制冷片結(jié)合電性電阻熱紅外技術(shù)

溫控范圍

室溫~85℃

溫控精度

±0.1℃

溫度均一性

±0.15℃

激發(fā)光波長

第一通道:470nm±10nm

檢測光波長

第一通道:520nm±10nm

激發(fā)光

高亮度LED

檢測器

新型光學(xué)檢測器,結(jié)合數(shù)字電路控制,光信號穩(wěn)定

熒光傳導(dǎo)方式

太空專用光纖傳導(dǎo)

結(jié)果判讀方式

根據(jù)擴增曲線軟件自動判讀陰陽性

結(jié)果顯示

可在機器顯示擴增曲線及出峰時間

檢測時間

≤40分鐘

檢測試劑

開放式恒溫?zé)晒鈾z測試劑

操作軟件

自帶軟件

控制方式

觸屏控制

檢測項目

可同時最多檢測16個項目

檢測靈敏度

10~109拷貝/反應(yīng),且樣品間無交叉污染

儀器分析功能

根據(jù)所檢測樣品,直接分析判定陽性或陰性;也可通過標(biāo)準(zhǔn)品進行絕對定量

軟件設(shè)置功能

可選擇反應(yīng)程序;可對反應(yīng)程序進行設(shè)置,如可設(shè)置反應(yīng)時間、可在反應(yīng)過程中修改反應(yīng)時間(縮短或延長)、可設(shè)置不同溫度,每個溫度檔位差為0.1℃;可將反應(yīng)程序保存為模板;可對不同孔進行重命名;可設(shè)置掃描間隔時間,范圍為 18~60S,默認(rèn)間隔為 60S;可設(shè)置陰陽性判斷閾值;閾值線可上下拉動等

工作環(huán)境溫度

18~35℃

儲存溫度

-20℃~55℃

環(huán)境相對濕度

≤85%

工作電壓

100~240V,50~60Hz

 

5 非洲豬瘟病毒熒光等溫擴增檢測試劑盒技術(shù)參數(shù)

作用與用途:用于血液、血球粉、淋巴結(jié)、脾臟、扁桃體以及豬肉產(chǎn)品中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。

1.規(guī)格:48次/盒;

2.保存條件:-20℃保存;

3.組成:熒光等溫擴增免提取反應(yīng)液:1100ul;Bst DNA聚合酶:75ul;陰性對照:1000ul;陽性對照:200ul;礦物油:1000ul;說明書:1份;

4.有效期:12個月;

5.本試劑盒適用于便攜式熒光定量PCR儀檢測箱及各種其他型號熒光定量PCR儀;

6.反應(yīng)體系:25ul;反應(yīng)時間:1h;報告基團:FAM;淬滅基團:None;

7.結(jié)果判定:有明確判定標(biāo)準(zhǔn),被檢樣品熒光信號有指數(shù)型增長,陽性對照Tt值≤45并出現(xiàn)典型的擴增曲線,陰性對照無Tt值并且無擴增曲線即S型擴增曲線,結(jié)果成立;被檢樣品Tt值≤45并出現(xiàn)典型的擴增曲線為陽性;被檢樣品無Tt值并且無典型擴增曲線為陰性;被檢樣品Tt值在45-60之間并出現(xiàn)典型的擴增曲線為可疑。對于可疑結(jié)果應(yīng)重新檢測,如果樣品FAM通道仍有典型S型擴增曲線且Tt值≤60,則判定為陽性,否則為陰性;

8.本試劑盒經(jīng)中國動物疫病預(yù)防控制中心評價,診斷敏感性100%,特異性100%;

9.該產(chǎn)品為疫控(診)【2019】74號文件中推薦的產(chǎn)品;

10. 產(chǎn)品生產(chǎn)廠家具有分子生物學(xué)類診斷制品GMP車間。


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